TÉCNICA DA PCR

ALTA RELEVÂNCIA

Relevância para a Área Policial/Pericial

Esta técnica possui alta relevância para profissionais da área policial e pericial.

Como É Cobrado em Provas

Componentes da PCR

• Para que serve cada um dos componentes
• Aspectos do design de primers - importante!
• Importante diferenciar as principais DNA polimerase usadas na PCR
• Principalmente quanto à correção de erros e fidelidade

PCR Multiplex

• Saber o que é a PCR multiplex e qual sua importância

Etapas dos Ciclos da PCR

• Detalhes do que ocorre em cada etapa
• Importante: saber temperaturas usadas em cada ciclo

Aplicações da PCR

• Principalmente no contexto forense. Qual sua importância?

Inibidores e Análise

• Saber quais os principais inibidores da PCR e como eliminá-los
• Saber quais técnicas são utilizadas para se analisar o resultado da PCR (ex. eletroforese em gel ou eletroforese capilar)
• Saber vantagem e desvantagem de cada uma

Métodos de Quantificação do DNA

• Absorbância UV, end-point PCT, PCR em tempo real (PCR quantitativa – qPCR)
• Saber diferenciar sondas Taqman de SYBR
• PCR quantitativo – muito importante!
  • Conhecer as técnicas, em que momento do ciclo quantificam, diferenças entre as técnicas

RT-PCR

• RT-PCR para avaliar expressão gênica (mRNA) – apenas conhecimento superficial

⚠️ Pontos de Atenção

• Cuidado para não confundir as siglas: RT-PCR (PCR com transcriptase reversa) com qPCR (PCR em tempo real)!!
• Cuidado com sinônimos das etapas de PCR
• Cuidado para não confundir enzimas envolvidas em outros processos moleculares com a DNA polimerase

📚 Como Estudar

• Técnica MUITO cobrada em provas da área pericial. Aprofundar sempre que possível.
• No entanto, quem não tem muito conhecimento em Biologia Molecular deve sempre iniciar os estudos pelo básico (visão geral da PCR, etapas, componentes), e só então ir aprofundando em cada parte da técnica.
• O importante é praticar e perceber pontos que necessitem de aprofundamento ou memorização.
• Após estudar/revisar conceitos, assistir a vídeos didáticos que demonstrem como se dá a reação de PCR pode ajudar a entender como se dá o processo e facilitar na hora de resolver questões.
  • Ex: https://www.youtube.com/watch?v=Yx-vX60QKQ4
• Aprofundamento: livro Introdução à Genética Forense

🔗 Fontes Gratuitas